Las funciones moleculares de foliculina (FLCN) son poco conocidas, pero las interacciones indirectas entre FLCN y la AMPK (de la red de señalización mTOR) mediada por FNIP1 FNIP2 y se han establecido firmemente ( Baba M et al , 2006; Hasumi H et al , 2008; Takagi Y et al , 2008), lo que sugiere un papel para FLCN en nutrientes / energía de detección a través de la vía de señalización AMPK/mTORC1.
El papel funcional de FLCN de señalización mTOR es controvertida, ya varias publicaciones recientes han reportado efectos opuestos sobre la proteína ribosomal S6 fosforilada (P-S6) de señalización como consecuencia de la regulación a la baja FLCN. Dos estudios recientemente que regulación a la baja transitoria de FLCN de siRNA en líneas celulares humanas de los resultados en la reducción de p-S6 ( Hartman TR et al, 2009; Takagi Y et al, 2008). Reducción de la p-S6 también se observó en los quistes renales en desarrollo en los ratones heterocigotos para FLCN (Hartman TR et al, 2009). En contraste, el riñón específica nocaut homocigotos de los resultados de FLCN en un aumento de p-S6, lo que contribuyó al desarrollo de los riñones poliquísticos ( Baba M et al , 2008; Chen J et al , 2008). Para confundir el asunto, octavos de final de la FLCN homólogo en S. pombe reveló que FLCN, que se cree que actúan en el ámbito de la AMPK, tiene un papel junto a bioquímica del TSC2 objetivo de AMPK en el transporte de aminoácidos ( van Slegtenhorst M et al, 2007). Tales papeles opuestos son sorprendentes dado las características clínicas se superponen (piel harmatomas, pulmón y los quistes renales, así como los carcinomas renales) asociados con el síndrome de BHD y tanto complejo de esclerosis tuberosa (TSC) la enfermedad e indicar, además, que la función de FLCN en AMPK/mTORC1 señalización es compleja.
Para comprender mejor el mecanismo molecular que subyace a la tumorigénesis síndrome de BHD, es una prioridad clara para dilucidar la función de FLCN. Una de las maneras en que esto sea posible es mediante la caracterización de los sitios de fosforilación de una proteína, es decir FLCN y la identificación de quinasas que son responsables y en qué orden, si esto ocurre, varios sitios de fosforilación están presentes.
Clásicamente una serie de anticuerpos se utilizan para detectar estos sitios ya que los anticuerpos específicos puede detectar si una proteína se fosforila en un sitio particular: anti-fosfo-tirosina anticuerpos monoclonales han sido ampliamente utilizados debido a que reaccionan con gran cantidad de proteínas que contienen residuos de tirosina fosforilados. En contraste, los anticuerpos monoclonales contra fosfo-serina o treonina son impopulares, ya que su afinidad y especificidad son menos que óptimas. Para lograr la caracterización exacta de los eventos de señalización, es deseable para elevar un buen anti-fosfo-sitio-específico de anticuerpo para detectar claramente especies fosforilados.
Baba et al (2006) ya se observó que la rata FLCN migran como múltiples bandas en el análisis de inmunoblot. A través de una serie de experimentos se identificó que la migración de FLCN se vio afectada por la fosforilación en la región amino-terminal y que FLCN rata tiene varios sitios de fosforilación. Wang et al (2009) generó un anticuerpo policlonal de conejo (BHD-P1) específico para un . residuos fosforilados identificados mediante ensayos de mutagénesis dirigida sitio - Ser62, y probado con éxito su reactividad frente a FLCN endógena a partir de humanos, de ratón y las líneas de células de rata, concluyendo que FLCN es fosforilados en Ser62 in vivo Estudios posteriores demostraron que:
- Ser62 fosforilación de forma indirecta hasta regulada por la AMPK y que otro resto está directamente fosforilada por AMPK y;
- Ser62 fosforilación se incrementa mediante la unión con FLCN-que interactúan las proteínas (FNIP1 y / FNIP2).
Estos resultados ponen de manifiesto un importante aspectof FLCN bioquímica, que es que el complejo FLCN-AMPK-FNIP está regulada por la fosforilación de Ser62, y nos lleva un paso más para entender el papel de FLCN en la vía de señalización mTOR. Sin embargo, quedan muchas preguntas sin respuesta y el hecho de que FLCN tiene varios sitios de fosforilación, sin duda, hacer más difícil para dilucidar su función, pero está claro que se están haciendo progresos y que los indicios se ser encontrado por los investigadores. La generación de los anticuerpos BHD-P1 también es notable ya que ahora puede ser utilizada por otros laboratorios para arrojar luz sobre aspectos similares de las interacciones FLCN.
