FLCN-FNIP2-AMPK et MNU apoptose induite

protéines de réparation de l'ADN semblent jouer un rôle important à la fois dans le développement et la progression du carcinome à cellules rénales, comme cela a été discuté dans de précédents billets de blog à partir de 2010 et 2011 . Ces protéines sont responsables de la réparation des lésions de l'ADN causées par un large éventail d'agents, tels que la N-méthyl-N-nitrosourée (MNU) chimique alkylant. Lorsque l'ADN endommagé ne peut être réparé, les cellules sont éliminées par apoptose afin de prévenir la propagation des lésions potentiellement délétères. Ce processus est d'un intérêt particulier pour le syndrome de BHD comme Komori et al. (2009) ont constaté que MAPO1 (ce qui est communément connu sous le nom FNIP2) est impliqué dans l'apoptose induite par le MNU. Cette constatation a été pris d'autres par le travail dans le même laboratoire, ce qui suggère que FLCN et AMPK , en plus de FNIP2 , sont également liés à l'induction de l'apoptose par MNU ( Lim et al. 2011 ).

Des expériences de co-immunoprécipitation en utilisant la souris YT102 Mgmt ^{- / -} cellules, qui n'ont pas l'enzyme MGMT que les réparations alkylée ADN, a confirmé que FNIP2 interagit avec les deux FLCN et AMPK. Les auteurs ont ensuite montré que siRNA knockdown de FLCN et AMPKα dans cette lignée cellulaire supprimé leur réponse apoptotique de MNU par rapport aux témoins de siRNA. Ils ont ensuite utilisé le composé C (un inhibiteur spécifique de l'AMPK) pour montrer qu'il a aussi supprimé l'apoptose induite par le MNU par rapport aux cellules non traitées YT102. AMPK est habituellement activé après traitement MNU, qui est associé à une augmentation du niveau de phosphorylation AMPKα. Cependant, moins de cette activation a été observée après un traitement composé C.

Ce résultat a été étudiée plus loin en traitant les cellules avec YT102 MNU, et d'évaluer les niveaux de AMPKα phosphorylée sur 72 heures. Ici, Lim et al. (2011) a vu que les niveaux de phosphorylée AMPKα progressivement augmenté au fil du temps, mais que cette augmentation a été abrogé par le knockdown siARN médiée par FLCN. En outre, KH101 Mgmt ^{- / -} Fnip2 ^{+ / -.} Cellules, qui se sont avérées résistantes à l'apoptose induite par MNU Komori et al (2009), a également montré aucune augmentation de AMPKα phosphorylée après traitement MNU.

Pour confirmer que activation de l'AMPK est impliqué dans l'induction de l'apoptose, AICAR (un activateur spécifique de l'AMPK) a été ajouté aux cellules YT102 et KH101. Ce traitement a augmenté les niveaux de phosphorylation AMPKα, ainsi que le montant de la mort cellulaire détectée par coloration au bleu trypan dans les cellules YT102. Cependant, aucun de ces hausses ont été observées dans les cellules FNIP2 défectueux KH101 après le traitement. Pour voir si cette mort cellulaire est due à l'apoptose, la dépolarisation de la membrane mitochondriale (qui est connu pour se produire au cours de l'apoptose) a été mesurée dans ces cellules, et il pourrait être considéré que cette dépolarisation a eu lieu dans les cellules YT102 (mais pas les cellules KH101) après l'addition de AICAR. Des résultats similaires ont été obtenus avec YT102 cellules traitées avec l'AICAR et FLCN-siRNA, où moins la mort cellulaire, la dépolarisation de la membrane mitochondriale et la phosphorylation AMPKα ont été observées par rapport aux témoins de siRNA.

Ensemble, ces résultats suggèrent que FLCN et FNIP2 jouent un rôle dans l'activation de l'AMPK et l'induction de l'apoptose par MNU. Cependant, le mécanisme exact par lequel cela se produit est encore inconnue, et l'élucidation de ce processus devrait nous aider à mieux comprendre la physiopathologie du syndrome de BHD.

• Komori K, Takagi Y, M Sanada, Lim TH, Nakatsu Y, Tsuzuki T, Sekiguchi M, M & Hidaka (2009). Une nouvelle protéine, MAPO1, qui fonctionne dans l'apoptose déclenchée par O6-méthylguanine mésappariement de l'ADN Oncogene, 28 (8), 1142-1150 PMID:. 19137017
• Lim TH, Fujikane R, S Sano, Sakagami R, Y Nakatsu, Tsuzuki T, Sekiguchi M, M & Hidaka (2011). L'activation de la protéine kinase activée par l'AMP par MAPO1 et FLCN induit l'apoptose déclenchée par décalage de base alkylée dans l'ADN réparation de l'ADN PMID:. 22209521

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